western blotting

定義：總蛋白進行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，后將蛋白質轉至尼龍膜，用特定蛋白質抗體進行免疫反應，顯色后可顯示該特定蛋白的存在與表達量。用來檢測在不均一的蛋白質樣品中是否存在目標蛋白的一種方法。

學科：細胞生物學_細胞生物學技術

相關名詞：聚丙烯酰胺凝膠電泳 免疫反應 抗原抗體復合物

圖片來源：視覺中國

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蛋白質印跡法也稱免疫印跡法，是一種常用的蛋白質檢測方法，它通過電泳將目標蛋白從復雜的樣品中分離出來，然后將特異性抗體與待測蛋白結合，最后利用免疫染色技術將目標蛋白可視化地顯示在固相載體上并進行定量分析。

蛋白質印跡法通常包括以下步驟：

1.提取總蛋白質：首先需要從組織、細胞或體液等生物樣本中提取總蛋白質。在這個過程中需要注意避免蛋白質的降解和失活。

2.分離蛋白質：將提取的蛋白質進行聚丙烯酰胺凝膠電泳，電泳后不同相對分子質量的蛋白質被分離。不同的蛋白質需要不同的電泳條件（電壓、電流、時間等參數）才能得到最佳分離效果。

3.轉移蛋白質：將分離后的蛋白質轉移到硝酸纖維素膜或其他固相載體上，使蛋白質表面化，以便與特異性抗體相結合。需要控制電轉移時間和轉移緩沖液的濃度等，以確保蛋白質能夠被充分轉移并保持活性。

4.免疫反應：目標蛋白作為抗原與相應的第一抗體特異性結合，酶或同位素標記的第二抗體再與第一抗體特異性結合，形成抗原抗體復合物。

5.檢測：使用適當的標記物（如熒光染料、化學發光劑等）對抗原抗體復合物進行檢測，從而確定目標蛋白的存在及相對濃度。

6.結果分析：對免疫印跡法的結果進行定量分析和比較，以確定目標蛋白的相對濃度及表達情況。進行結果分析時需要注意結果的可靠性和重復性。

蛋白質印跡法具有靈敏度高、特異性高和可定量等優點，被廣泛應用于生物醫學研究、藥物開發和臨床診斷等領域。

（延伸閱讀作者：西華師范大學生態研究院 楊煒蓉博士）

責任編輯：張鵬輝